迈浦生物

DNA克隆测序

DNA克隆测序

DNA克隆是把外源基因与克隆载体进行体外连接,继而转化宿主细胞,筛选出含有目的基因重组质粒的转化子,并将该转化子大量扩增提取重组质粒的过程。迈浦生物拥有成熟的DNA克隆技术和完善的服务流程,可以根据序列特点和客户需要选用TA克隆、平端克隆、酶切克隆等多种克隆方法进行DNA克隆,帮您提高科研工作效率

一、TA克隆

利用Taq聚合酶和它能够在末端添加A的功能,在每条PCR扩增产物的3' 端自动添加一个3'-A突出端,然后将PCR产物连接到带有“T”末端的载体上,转化,筛选,测序。

1、服务内容

PCR产物TA克隆服务

将PCR产物通过TA克隆直接连接到T载体上。

PCR扩增及TA克隆服务

客户提供模板以及扩增相关信息,由我们设计合成引物并进行后续的PCR扩增,将PCR产物连接到T载体上

2、客户提供样品及信息

样品类型 样品量 备注
PCR原液 >50ul,目的带清晰,DNA量在1ug以上 目的片断长度,扩增引物引物序列,如果使用含3'→5' 外切酶活性的聚合酶,请提供PCR引物,注明您进行PCR时所使用的酶的名称,用Pfu酶扩增得到的PCR产物由于两端没有加A,不能直接用于T/A克隆
纯化PCR产物 目的带清晰,电泳检测亮度不小于30ng/ul 目的片断长度,扩增引物引物序列,如果使用含3'→5' 外切酶活性的聚合酶,请提供PCR引物
DNA模板 样品浓度>10ng/ul,最小量>2ug,OD260/OD280值:1.80~2.00 目的片断长度,扩增引物引物序列,如果使用含3'→5' 外切酶活性的聚合酶,请提供PCR引物

3、服务价格

片段长度 价 格(¥) 周 期
<600bp 200.00 5个工作日
600~1500bp 300.00 5个工作日
1500~3000bp 400.00 8个工作日
>3000bp 询价

4、服务说明:

使用pTG19-T载体,如果需要使用其他T载体,请注明。

PCR产物纯化、克隆后,筛选三个以上阳性克隆,送一个进行测序反应,判断测序结果是否正确的依据是:送测克隆中含有大小相符的插入片段,并可以看到客户的引物序列(只要包含其中一侧引物)。由于模板来源的不同和PCR过程中可能会引入突变,不保证序列是否与客户期望完全相符。

一次收费内容只包含PCR纯化,连接转化,克隆筛选,一次测序反应,及质粒和穿刺菌。当克隆片段大于600bp时,需要测通全序列,按照正常对外测序要加收相应的测序及合成中间测序引物的费用。

如果客户使用含3'→5' 外切酶活性的聚合酶扩增所得到的PCR产物,我们需要重新扩增PCR产物.

如果使用其它T载体,则需根据载体价格适当加费。

5、提交结果形式

一份冻干后的送测质粒

相应测序结果

穿刺菌

T载体图谱和序列

TA克隆实验报告